研究实践
多肽天然产物NAI-112的生物合成
----第三十一届江苏省青少年科技创新大赛 中学科技创新成果项目
| 项目编号 | 学科分类 | 竞赛组别 | 项目类型 | 代表队 | 关键词 |
| CH203009 | 化学 | 高中组 | 个人项目 | 江苏 | 结构调控 异源表达 112 NAI RiPPS |
项目简介：
目的：我们希望发现NAI-112前体AplA与两种修饰酶AplKC和AplG反应时的位点，并了解反应细节。
方法：用PCR扩增目标基因及定点突变AplA基因，后将基因引入质粒。使带有突变前或后的AplA基因的质粒分别和带有AplKC与AplG基因的质粒在大肠杆菌体内共转化，让基因在大肠杆菌体内表达，产出多肽。纯化出多肽产物，对其进行质谱分析，并比较AplA突变前后产物的不同。
实验结果：当AplA的Thr3和Ser16被Ala取代时，AplA在AplKC修饰后减少108Da，AplG修饰后增加146Da，与未突变时一致。当Trp13被Ala取代时，AplA在AplKC修饰后减少90Da，AplG修饰后增加146Da，与未突变时相比，产物多出18Da，少脱了一个水。
分析：Thr3和Ser16对AplA的修饰无影响。Trp13经研究表明，它不仅是糖基化位点，且影响脱水活性，可能间接影响环化。